Izolace DNA je klíčovým krokem v mnoha molekulárně genetických technikách. Získání kvalitního a dostatečného množství DNA je zásadní pro úspěšné provedení následných analýz. Jednou z běžných a méně invazivních metod pro získání DNA je odběr bukálního stěru.
Odběr bukálního stěru - instrukce
Pro úspěšné provedení genetického vyšetření je nezbytný důkladný odběr buněk ústní sliznice, a to pomocí sterilního odběrového tampónu (bukální stěr). Dodržení níže uvedeného postupu je klíčové pro získání dostatečného množství DNA. Před zahájením odběru si, prosím, pozorně přečtěte tyto instrukce:
- Minimálně 60 minut před odběrem nejezte, nekuřte, nepijte (mimo neslazené nesycené vody), nežvýkejte žvýkačku ani neprovádějte ústní hygienu.
- Ústní dutina nesmí být před odběrem bukálního stěru kontaminována žádným biologickým materiálem další osoby, proto je nutné vyhnout se činnostem jako je kojení, líbání apod., a to nejméně 60 minut před odběrem vzorku.
- Před manipulací s odběrovou sadou si pečlivě umyjte (popř. vydesinfikujte) a osušte ruce.
- Pokud je to možné, těsně před odběrem si vypláchněte ústa neslazenou nesycenou vodou.
- Vyjměte zkumavku s odběrovým tampónem z originálního sáčku a popište ji čitelně jménem, příjmením, datem narození odebírané osoby a datem odběru (použijte permanentní popisovač).
- Vyjměte odběrový tampón ze zkumavky, tampón držte vždy jen za koncovou, nesterilní část. Během procesu odebírání vzorku dbejte na to, aby sterilní část odběrové sady (celá tyčinka zakončená tampónem) nepřišla za žádných okolností do styku s žádným jiným materiálem než s ústní dutinou osoby, u které má být provedeno požadované vyšetření!
- Stěrový tampón vložte do úst (do prostoru mezi dásní a vnitřní stranou tváře) a pohybujte jí dozadu a dopředu (jako při čištění zubů) a zároveň jím otáčejte. Je vhodné vyvíjet přiměřený tlak na povrch sliznice, aby došlo k odloučení dostatečného množství bukálních buněk. Jedním odběrovým tampónem otírejte sliznici obou tváří přibližně po dobu 1 minuty. Pokud se v ústech během odběru vytvoří nadměrné množství slin, doporučujeme odběr přerušit a pokračovat až po jejich polknutí.
- Po odběru vložte tampón zpět do původní zkumavky a pečlivě ji uzavřete. Vzorky jednotlivých osob vložte do jednotlivých sáčků.
Skladování vzorků
Vzorky stěru z bukální sliznice lze uchovávat podle následujících doporučení:
| Teplota | Maximální doba skladování |
|---|---|
| Pokojová teplota | 1 týden (na tmavém místě) |
| 2-8 °C (lednice) | 1 měsíc |
| Nižší než -15 °C | 1 rok |
Fenol-chloroformová deproteinace
Fenol-chloroformová deproteinace je metoda používaná k odstranění kontaminujících proteinů z roztoku DNA. Tento proces je klíčový pro získání čisté DNA pro následné analýzy.
Základní kroky zahrnují:
Čtěte také: Vše o předávacím protokolu fasády
- Homogenizace tkáně v pufru.
- Důkladné promíchání s fenol-chloroformovou směsí, která oddělí proteiny do organické fáze, zatímco DNA zůstane ve vodní fázi.
- Centrifugace, která oddělí fáze a umožní sběr vodní fáze obsahující DNA.
Izolace DNA z neseparované krve
Izolace DNA může být prováděna i z krve. Následující postup popisuje izolaci DNA z neseparované krve s použitím DNA vazebného pufru a partikulí:
- Do 1,5 ml zkumavky vpravit 1 ml DNA vazebného pufru, 50 µl DNA bind partikulí (po extensivním protY epání a míchání) a 50 µl krve s EDTA.
- Směs inkubovat 10 minut.
- Centrifugovat na mikrofuze 30 sekund.
- Peletu promýt 1 ml acetonu a následně vysušit 10 minut.
- Přidat eluční pufr, vortexovat a inkubovat 10 minut při 56 °C, čímž dojde k uvolnění DNA z DNA bind.
Čtěte také: Kompletní protokol k požární odolnosti Rigips konstrukcí
Čtěte také: vše, co potřebujete vědět o požární ochraně
tags: #protokol #izolace #dna #zbukalniho #steru #postup