Deoxyribonukleová kyselina neboli DNA je základním konstrukčním kamenem každého živého organismu. Pasáž popisuje složení a strukturu deoxyribonukleové kyseliny neboli DNA. Vysvětlení významu DNA je klíčové pro pochopení její role v živých organismech.
Princip izolace DNA
Pro izolaci DNA budeme potřebovat mýdlový roztok soli. Tento roztok nám umožní proniknout buněčnými stěnami cibule a uvolnit DNA do vodného roztoku. Sůl naruší stěny buněk a uvolní DNA do vody. Abychom DNA uvolnili, musíme ještě odstranit histony pomocí enzymu proteázy. Následně do roztoku přidáme ethanol, ve kterém je DNA nerozpustná a sráží se.
Domácí izolace DNA z kuchyňské cibule (a dalších rostlin)
Zde se dozvíme návod, jak si lze DNA doma izolovat z různých rostlin.Při pokusu cibuli rozmačkáme, přidáme teplou vodu a chlorid sodný. Směs po zahřátí zfiltrujeme.Poté se dozvíme návod, jak si lze DNA doma izolovat z jahod pomocí mycího prostředku, soli a ethanolu.Jak lze izolovat DNA z banánu? Při pokusu banán rozmačkáme, přidáme teplou vodu a chlorid sodný. Sůl naruší stěny buněk a uvolní DNA do vody. Směs přefiltrujeme a přidáme alkohol, ve kterém se DNA sráží.
Metody izolace DNA v laboratoři
V této práci byla izolována DNA z deseti vzorků vybraných potravin a krmiv pomocí osmi různých extrakčních kitů, které jsou běžně dostupné na trhu. Hlavním cílem bylo ověřit kvalitu a kvantitu DNA, vybrat vhodnou metodu pro izolaci DNA z potravin a krmiv a získat spolehlivé výsledky pro další analýzy. Kvalita, koncentrace a čistota izolované DNA byla ověřena pomocí gelové elektroforézy, měření absorbance spektrofotometrem Nanodrop 2000 (Thermo Scientific) a polymerázové řetězové reakce (PCR). Na pokusu je ukázána izolace molekul DNA z kuřecích jater roztokem kuchyňské soli. DNA extrahovaná z konzervovaných potravin a krmiv byla více degradovaná, její obsah a čistota byla nižší a také PCR analýza byla obtížnější v porovnání s DNA, která byla izolována z masa, šunky, párků, granulovaných krmiv pro psy a kuřecí moučky. NucleoSpin Food a JetQuick Tissue DNA Spin Kit byly vybrány jako nejlepší metody pro extrakci DNA vybraných potravin a krmiv.
Použité extrakční metody a vzorky
Pro extrakci DNA byly použity sady od několika různých výrobců: NucleoSpin Food (Marchery-Nagel), Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega), Invisorb Spin Food Kit I (Invitek), Wizard SV Genomic DNA Purification System (Promega), JetQuick Tissue DNA Spin Kit (Genomed), RNA Blue (Top-Bio), JetQuick Blood & Cell Culture Kit (Genomed), QIAamp DNA Mini Kit a QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen).
Čtěte také: Zjistěte více o metodách analýzy stavebních materiálů
Pro extrakci DNA byly použity syrové kuřecí maso, šunka, párky, konzervované obědové maso, paštika, konzervované krmivo pro psy, kompletní granulované krmivo pro psy a kuřecí moučka.
Výsledky a porovnání metod
Byly zjištěny rozdíly mezi izolovanou DNA z konzervovaných produktů a masa, šunky, párků, granulovaného krmiva pro psy a kuřecí moučky. V konzervovaných potravinách a krmivech byla DNA více degradovaná, obsah DNA a čistota DNA byly nižší a také amplifikace PCR byla nejobtížnější. Celkový výtěžek a kvalita DNA mají významný vliv na amplifikaci produktů PCR. Nejlepších výsledků bylo dosaženo s NucleoSpin Food a JetQuick Tissue DNA Spin Kit. DNA extrahovaná těmito metodami prokázala nejvyšší výtěžky, čistotu a kvalitu templátu ve všech potravinách a krmivech a výsledky PCR analýzy jsou vynikající reprodukovatelné.
Tabulka: Porovnání extrakčních kitů pro izolaci DNA z potravin a krmiv
| Extrakční kit | Výrobce | Vhodnost pro vzorky | Výsledky (výtěžek, čistota, kvalita templátu) |
|---|---|---|---|
| NucleoSpin Food | Marchery-Nagel | Potraviny, krmiva | Nejlepší: vysoký výtěžek, čistota, kvalita templátu, reprodukovatelnost PCR |
| JetQuick Tissue DNA Spin Kit | Genomed | Potraviny, krmiva | Nejlepší: vysoký výtěžek, čistota, kvalita templátu, reprodukovatelnost PCR |
| Wizard Genomic DNA Purification Kit | Promega | Obecné použití | Dobré, ale ne nejlepší pro všechny typy vzorků |
| Invisorb Spin Food Kit I | Invitek | Potraviny | Variabilní výsledky v závislosti na typu vzorku |
| QIAamp DNA Mini Kit | Qiagen | Obecné použití | Spolehlivé, ale ne vždy optimální pro degradovanou DNA |
Čtěte také: Vše o izolaci a detekci defektů v laboratoři
Čtěte také: Jak na sádrokartonové konstrukce
tags: #laboratorni #cviceni #izolace #dna #z #kuchynske